寬分子量非變性電泳蛋白質(zhì)Marker
III（21-1000 kD）
Broad MW Native
Electrophoresis Protein Marker III（21-1000 kD）
|
貨號
|
名稱
|
規(guī)格
|
|
RTD6104
|
寬分子量非變性電泳蛋白質(zhì)Marker III（21-1000
kD）
|
20次（100
μl）
|
●儲存、運(yùn)輸及效期：
-20℃保存；濕冰運(yùn)輸；有效期為12個(gè)月。
●技術(shù)規(guī)格：
|
技術(shù)規(guī)格
|
|
主條帶數(shù)量
|
8條
|
|
貯存緩沖液
|
50 mM Tris-HCl pH7.5，15%甘油，穩(wěn)定劑，溴酚藍(lán)
|
|
濃度
|
0.2-0.4 μg/μl
|
|
上樣前處理
|
溶化混勻后直接上樣，不要加熱處理
|
|
推薦凝膠體系
|
8%或4-15%Tris-甘氨酸非變性凝膠
|
|
推薦上樣體積
|
5 μl（1mm厚度10齒梳子）
|
|
推薦染色方法
|
非預(yù)染Marker，電泳時(shí)不可見條帶，電泳后需要考馬斯亮藍(lán)染色可以觀察條帶
|
|
不適用于變性電泳
|
為非變性Marker，不適用于變性電泳
|
● 產(chǎn)品簡介：
本產(chǎn)品有5種蛋白組成，分子量范圍為21-1000 kD，經(jīng)過非變性電泳后，用考馬斯亮藍(lán)染色后可以得到8條主帶。
|
蛋白名稱
|
分子量(kD)
|
蛋白來源
|
pI
|
說明
|
|
Ferritin
|
~440
~880
~1000
|
equine
spleen
|
N/A
|
非變性下440
kD，880
kD和1000
kD
|
|
RC2
|
~200
|
重組蛋白
|
6.7
|
單體蛋白分子量為75
kD，在Tris-甘氨酸非變性下表現(xiàn)為分子量~200
kD
|
|
RC1
|
~66
~132
|
重組蛋白
|
4.7
|
單體蛋白分子量為~66 kD，在Tris-甘氨酸非變性下表現(xiàn)為單體（分子量~66 kD）和二聚體（分子量~132 kD）
|
|
Ovalbumin
|
~45
|
egg
white
|
5.2
|
球蛋白，分子量為45 kD，非變性條件下大于45 kD會出現(xiàn)電荷異構(gòu)體（charge
isomer，分子量~50 kD）
|
|
Trypsin
Inhibitor
|
~21
|
Soybean
|
4.5
|
非變性下分子量~21
kD
|
● 使用說明：
1. 取出產(chǎn)品后，常溫溶化后，徹底混勻，上樣電泳。
注：上樣量根據(jù)膠的厚度和梳子的寬度確定。一般說來，1.0厚度10齒梳子加樣孔上樣5 μl，1.0厚度15齒梳子加樣孔上樣量2.5 μl，其他規(guī)格梳子請適當(dāng)調(diào)整上樣量。
2. 該產(chǎn)品不含蛋白凝膠制備試劑，您可以選擇非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒（貨號：
RTD6130或RTD6135）。如自備試劑，經(jīng)典Laemmli系統(tǒng)中把制膠溶液、電泳緩沖液和上樣緩沖液中的SDS和還原劑（DTT或β-巰基乙醇）全部去除即可進(jìn)行非變性電泳。
3. 電泳條件：
建議使用8%，10%非變性膠或者4-15%梯度非變性膠（貨號：RTD6117-0415）進(jìn)行電泳。
|
恒電壓
|
120 V
|
|
起始電流
|
27-35
mA/板膠
|
|
結(jié)束電流
|
7-10
mA/板膠
|
|
電泳時(shí)間
|
50-60
min
|
4. 電泳結(jié)束后，考馬斯亮藍(lán)染色，觀察結(jié)果。
注：使用銀染染色時(shí)，由于靈敏度高于考馬斯亮藍(lán)染色方法，需要適當(dāng)降低Marker上樣量，一般稀釋50倍后上樣。
● 注意事項(xiàng)：
1. 該產(chǎn)品僅適用于酸性蛋白非變性電泳，不適用于變性電泳和堿性蛋白非變性電泳。非變性蛋白電泳條件下，不能精確判斷蛋白的分子量大小，更多是作為相對參照。因?yàn)樵诜亲冃詶l件下，蛋白的電荷，空間結(jié)構(gòu)，物化性質(zhì)等都對蛋白的遷移有影響，所以非變性電泳的蛋白分子量需謹(jǐn)慎解讀并結(jié)合其他方法（如SEC-HPLC）驗(yàn)證。
2. 非變性蛋白電泳Marker由于要保持蛋白的天然結(jié)構(gòu)，都沒有偶聯(lián)染料，在電泳時(shí)基本都看不到條帶；但是RTD6104中的440
kD由于天然蛋白中含有鐵離子，使得電泳后在膠上可見淡黃色，凝膠轉(zhuǎn)膜后，膜上也可以看到黃色的440 kDa條帶，可以大體判斷Marker轉(zhuǎn)膜的效果。
3. 非變性蛋白Marker轉(zhuǎn)膜后可以用麗春紅染色液（貨號：RTD6301）染膜，可以看到Marker條帶，順便可以檢測轉(zhuǎn)膜效率，然而要注意的是麗春紅染色靈敏度比較低，可能不能完全看到完整的Marker條帶。
4. 推薦使用8%，10%（貨號：RTD6130）或者4-15%的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳（貨號：RTD6135）。其他濃度并非不適用，因?yàn)榉亲冃缘鞍譓arker遷移率不僅受分子量影響，還受其他因素影響，所以在不同濃度的凝膠中，分子量標(biāo)記的遷移位置會變化，主帶的電荷異構(gòu)體的表觀分子量也會變化。
實(shí)驗(yàn)示例：
1 4-15%Tris-甘氨酸非變性
2 4-16% Blue Native gel
